BIOMOL LCS/2010:TP 4: Difference between revisions
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* Que características deve ter um primer de PCR?. | |||
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*Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita a identificação das mutações presentes no gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo. | |||
*Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita o estudo da expressão do gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo. | |||
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Se quiser incluir detalhes práticos sobre as reacções, consulte: | |||
[http://www.fermentas.com/templates/files/tiny_mce/coa_pdf/coa_ep0701.pdf Protocolo Taq polimerase] | |||
[http://www.fermentas.com/templates/files/tiny_mce/coa_pdf/coa_ep0441.pdf Protocolo Transcriptase reversa] | |||
Latest revision as of 03:27, 23 March 2010
PCR e RT-PCR
Introdução
A técnica do PCR permite obter um grande número de cópias de uma sequência de DNA de interesse a partir de uma quantidade mínima de material. Nas aplicações de maior sensibilidade, uma única molécula de DNA pode ser suficiente para gerar milhões de cópias. Este é por issoo método base para um número muito grande de técnicas de diagnóstico molecular, incluindo em particular os diagnósticos que requerem sequenciação de DNA.
A seguinte animação explica o funcionamento da técnica: PCR
Quando é necessário proceder à caracterização da expressão de genes, é também possível aplicar a técnica de PCR acoplando-a a uma reacção de transcrição reversa, como explicado na seguinte animação: RT-PCR
Note que o resultado de um ensaio de PCR ou RT-PCR tem geralmente de ser visualisado por separação electroforética dos produtos de reacção.
Questões
- Que características deve ter um primer de PCR?.
- Como qualquer DNA polimerase, a transcriptase reversa requer um primer iniciador, que pode ser de 3 tipos distintos: específico de gene, oligo-dT ou random (uma mistura aleatória de 6 a 8 nucleótidos). Em que situações pode ser utilizado cada um destes primers e que vantagens/desvantagens relativas apresentam?
- Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita a identificação das mutações presentes no gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo.
- Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita o estudo da expressão do gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo.
Nota:
Se quiser incluir detalhes práticos sobre as reacções, consulte: Protocolo Taq polimerase Protocolo Transcriptase reversa
