BIOMOL LCS/2010:TP 4: Difference between revisions

From OpenWetWare
Jump to navigationJump to search
(New page: ===PCR e RT-PCR=== ====Introdução==== As sequências de genes e mRNAs com que temos vindo a trabalhar foram obtidas experimentalmente com base na técnica de sequênciação de DNA d...)
 
No edit summary
Line 4: Line 4:
====Introdução====
====Introdução====


As sequências de genes e mRNAs com que temos vindo a trabalhar foram obtidas experimentalmente com base na técnica de sequênciação de DNA desenvolvida nos anos 70 por Fred Sanger.
A técnica do PCR permite obter um grande número de cópias de uma sequência de DNA de interesse a partir de uma quantidade mínima de material. Nas aplicações de maior sensibilidade, uma única molécula de DNA pode ser suficiente para gerar milhões de cópias. Este é por issoo método base para um número muito grande de técnicas de diagnóstico molecular, incluindo em particular os diagnósticos que requerem sequenciação de DNA.


A seguinte animação explica o funcionamento da técnica:  
A seguinte animação explica o funcionamento da técnica:  
[http://www.dnalc.org/resources/animations/sangerseq.html Sanger sequencing ]
[http://www.dnalc.org/resources/animations/pcr.html l PCR ]


Actualmente utiliza-se uma versao mais moderna que recorre a DNA polimerases termoestáveis e nucleótidos fluorescents, permitindo maior sensibilidade e a leitura automática do resultado da sequênciação:
Quando é necessário proceder à caracterização da expressão de genes, é também possível aplicar a técnica de PCR acoplando-a a uma reacção de trasncrição reversa, como explicado na seguinte animação:
[http://www.dnalc.org/resources/animations/cycseq.html Cycle sequencing]
[http://www.bio.davidson.edu/Courses/immunology/Flash/RT_PCR.html RT-PCR]


Note que o resultado de uma sequenciação é um electroferograma, que depois é convertido em "As, Cs, Gs e Ts" por um programa informático.
Note que o resultado de um ensaio de PCR ou RT-PCR tem geralmente de ser visualisado por separação electroforética dos produtos de reacção.




Revision as of 17:16, 22 March 2010

PCR e RT-PCR

Introdução

A técnica do PCR permite obter um grande número de cópias de uma sequência de DNA de interesse a partir de uma quantidade mínima de material. Nas aplicações de maior sensibilidade, uma única molécula de DNA pode ser suficiente para gerar milhões de cópias. Este é por issoo método base para um número muito grande de técnicas de diagnóstico molecular, incluindo em particular os diagnósticos que requerem sequenciação de DNA.

A seguinte animação explica o funcionamento da técnica: l PCR

Quando é necessário proceder à caracterização da expressão de genes, é também possível aplicar a técnica de PCR acoplando-a a uma reacção de trasncrição reversa, como explicado na seguinte animação: RT-PCR

Note que o resultado de um ensaio de PCR ou RT-PCR tem geralmente de ser visualisado por separação electroforética dos produtos de reacção.


Questões

  • O que é necessário para fazer uma reacção de sequenciação?
Retrieved from "https://openwetware.org/mediawiki/index.php?title=BIOMOL_LCS/2010:TP_4&oldid=401246"