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introduction
Cell Lysisの機能評価
以上のように細胞死機構は重要なものなので、当然「cell Lysis」のパーツは過去のiGEMチームによっていくつか既に作られていました。しかし、パーツとして使いやすさを向上するためには、定量的な機能評価が大切です。
どれぐらいの働きをするのか？つまり、パーツを組み込んだ大腸菌を殺せるか(溶かせるか)？
ということを「プロモーター活性」で表すことにしました。
プロモーター活性とは？
遺伝子の発現はDNA→mRNA→タンパク質 という順に起こります。RNAポリメラーゼがプロモーター配列こ結合して、DNA上をスライドしながら遺伝情報をmRNAとしてとりだします(転写)。このmRNAがタンパク質に変換(翻訳)されて、そのタンパク質が様々な機能を担います。
「プロモーター活性」とは、「そのプロモーターのRNAポリメラーゼ結合できる強さ」です。
大腸菌では「DNA→mRNA：転写」の段階で遺伝子の発現を制御しているので、目的の遺伝子が働くかどうかは、このプロモーター活性が重要になります。
プロモーターの中には、特定の環境や物質に応じてプロモーター活性が上がるものが多種多様に存在しています。このようなプロモーターのパーツも色々開発されています。
これらとLysis cassetteを組み合わせることによって、様々な条件下でCell Lysisを誘導することが可能になりますが、どんなプロモーターでも細胞死を起こせるほどLysis cassetteを発現させることができる、というわけではないはずです。
どれぐらいプロモーター活性があればLysis cassetteが働くのかを解析しました。
Lysisbox
さらに汎用性のある細胞死機構をめざしてLysisboxを考えました。
これはLysis cassetteと、Lysis cassetteと拮抗的に作用してCell Lysisを阻害するAnti-Lysis遺伝子の発現をそれぞれ制御して、どんなプロモーターでもCell Lysisを誘導できるしくみです。
human practice
