IGEM:Peking/2007/Switch: DNA electrophoresis

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Contents

DNA 电泳

以下指0.5cm加样孔。2ng为检出下线,500ng以上拖尾。

Markers

Lambda DNA/EcoRI+HindIII Marker Fermentas

0.5ug/uL,3uL每次

Transgen 100bp DNA Ladder

5uL 每次

Transgen 1kb DNA Ladder

5uL 每次

含不同浓度琼脂糖的凝胶的分离范围

琼脂糖含量[%(w/v)] 线状DNA有效分离范围[kb]

0.3 5-60

0.6 1-20

0.7 0.8-10

0.9 0.5-7

1.2 0.4-6

1.5 0.2-3

2.0 0.1-2

电泳时间

以要观测的DNA明显与其他长度的DNA分开为宜,相应长度范围的Marker应得到分离清晰的图像。EB与DNA电泳方向相反,电泳时间过长会使EB迁移出凝胶,此时应将凝胶浸于1×TAE+EB溶液30min后成像。

Loading Buffer的选取

在0.5-1.4%的琼脂糖中,溴酚兰的移动速度相当于300bp的双链线状DNA,二甲苯青FF的移动速度相当于4kb的双链线状DNA。以染料不遮挡要观测的DNA为宜。

溶液配方

50×TAE 1L

Tris 242g

2M Tris-AC

HAC 57.1mL

0.5M EDTA(pH 8.0)100mL ,0.05M EDTA(pH 8.0)

定容至1L

1×TAE +EB 1L

50×TAE 20mL

0.04M Tris-AC+0.001M EDTA (pH 8.0)

10mg/mL EB 50uL 0.5ug/mL

H2O 980mL

10×Loading Buffer 50mL

溴酚兰/二甲苯青FF 20g 40% 溴酚兰/二甲苯青FF

甘油 25mL

50% 甘油

定容至50mL

倒胶方法

用1×TAE+EB配胶,1×TAE为电泳缓冲液

琼脂糖加热后要摇匀,待稍冷却后倒胶

加样孔在负极

恒压电泳,电流不可超过电泳仪量程

只使用一个电泳槽时,确保空闲的电泳槽断开

EB污染!!

EB为致癌物质。

EB污染区内任何物品应戴手套触摸。

严禁用触摸过含EB物质的手套触摸EB污染区以外的任何物品。

严禁将含有EB的物品拿出EB污染区以外。

电泳液单独回收,严禁倒入下水道内。

EB污染区和含EB的容器使用后请自己清洗整理干净。

EB污染区以外范围需尽快小心清理干净。如触摸到EB,应用大量水冲洗。

EB污染台微波炉上表面以上为非污染区,UVP仅暗箱内部紫外部分为污染区。

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