IGEM:Peking/2007/Switch: DNA electrophoresis
DNA 电泳
以下指0.5cm加样孔。2ng为检出下线,500ng以上拖尾。
Markers
Lambda DNA/EcoRI+HindIII Marker Fermentas
0.5ug/uL,3uL每次
Transgen 100bp DNA Ladder
5uL 每次
Transgen 1kb DNA Ladder
5uL 每次
含不同浓度琼脂糖的凝胶的分离范围
琼脂糖含量[%(w/v)] 线状DNA有效分离范围[kb]
0.3 5-60
0.6 1-20
0.7 0.8-10
0.9 0.5-7
1.2 0.4-6
1.5 0.2-3
2.0 0.1-2
电泳时间
以要观测的DNA明显与其他长度的DNA分开为宜,相应长度范围的Marker应得到分离清晰的图像。EB与DNA电泳方向相反,电泳时间过长会使EB迁移出凝胶,此时应将凝胶浸于1×TAE+EB溶液30min后成像。
Loading Buffer的选取
在0.5-1.4%的琼脂糖中,溴酚兰的移动速度相当于300bp的双链线状DNA,二甲苯青FF的移动速度相当于4kb的双链线状DNA。以染料不遮挡要观测的DNA为宜。
溶液配方
50×TAE 1L
Tris 242g
2M Tris-AC
HAC 57.1mL
0.5M EDTA(pH 8.0)100mL ,0.05M EDTA(pH 8.0)
定容至1L
1×TAE +EB 1L
50×TAE 20mL
0.04M Tris-AC+0.001M EDTA (pH 8.0)
10mg/mL EB 50uL 0.5ug/mL
H2O 980mL
10×Loading Buffer 50mL
溴酚兰/二甲苯青FF 20g 40% 溴酚兰/二甲苯青FF
甘油 25mL
50% 甘油
定容至50mL
倒胶方法
用1×TAE+EB配胶,1×TAE为电泳缓冲液
琼脂糖加热后要摇匀,待稍冷却后倒胶
加样孔在负极
恒压电泳,电流不可超过电泳仪量程
只使用一个电泳槽时,确保空闲的电泳槽断开
EB污染!!
EB为致癌物质。
EB污染区内任何物品应戴手套触摸。
严禁用触摸过含EB物质的手套触摸EB污染区以外的任何物品。
严禁将含有EB的物品拿出EB污染区以外。
电泳液单独回收,严禁倒入下水道内。
EB污染区和含EB的容器使用后请自己清洗整理干净。
EB污染区以外范围需尽快小心清理干净。如触摸到EB,应用大量水冲洗。
EB污染台微波炉上表面以上为非污染区,UVP仅暗箱内部紫外部分为污染区。