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==Conteúdos programático==
===Introdução ao diagnóstico molecular em medicina===
*Doenças monogénicas
*Doenças poligénicas
*Biologia forense
#CODIS
#STRs
* Tipagem HLA
#Tipagem Celular por FACS
#Genotipagem por PCR
# Genotipagem por Microarrays
*Farmacogenómica
#Citocromo P450
*Susceptibilidade a doenças infecciosas
#Susceptibilidade genética: SCID
#Resistência genética: HIV
*Doenças infecciosas
#Virologia
# Bacteriologia
#Resistência aos antibióticos
*Epidemiologia molecular
# Filogenética
# Fingerprinting (genotipagem)
===Bases Biológicas do Diagnóstico Molecular===
*Estrutura do DNA e RNA
#Organização do DNA 
# RNAs codificantes e não codificantes
# RNA de interferência
*Expressão genética e síntese proteica
#Transcrição
#Maquinaria de transcrição procariótica e eucariótica
#Edição do RNA
#Síntese proteica
#Modificações pós-translacionais
===Ferramentas do Diagnóstico Molecular===
*Enzimas que modificam ácidos nucleicos
*Sistemas e vectores de clonagem
#Plasmídeos
#Cosmídeos e fagmídos
# YACs, BACs
#Transformação, conjugação, transfeção e electroporação
*Sistemas de selecção de recombinantes
#Antibióticos
# Sistemas auxotróficos
#Proteínas fluorescentes
*Sistemas de produção de proteínas recombinantes
*Bibliotecas genómicas (genotecas)
*Hibridação de ácidos nucleicos
# Southern blotting
#Northern blotting
====Métodos da baseados na Polimerase====
*Amplificações pela polimerase
#RFLP-PCR
#RAPD-PCR
#Multiplex PCR
# PCR Multiplex alelo específico
#PCR Longo
# PCR Competitivo
#PCR colony
#Touchdown (gradiente) e Hot Start
# PCR Degenerado
#PCR In situ
# PCR Inverso
# RACE
#Nested PCR
#RT-PCR / RT-PCR
# Methylation Spectific PCR (MS-PCR)
*PCR em tempo real
#Conceitos
#Syber-green
#Sondas
#Curvas de calibração e quantificação
====Métodos baseados na Ligase e MLPA====
*Aplicações pela ligase
#LCR
#MLPA
*Métodos especiais
# DNA ramificado (bDNA)
#Ribotipagem
===Fundamentos de fluorescência===
*Espectro electromagnético da luz visível
#Amplitude de onda
# Comprimento de onda
# Frequência
*Fluoróforos
#Estado fundamental
#Estado excitado
*Diagrama de Jablonski
# Lei de Kasha
#Lei de Planck
#Desvio de Stokes (Stokes shift)
#FRET - Förster resonance energy transfer
#Cromóforos e fluoróforos
#Quenching
#Detecção in vivo da interacção de proteínas
#Sondas moleculares
*Microscopia
#Fluoróforos usados em microscopia
# Photobleaching (decaimento)
#Métodos para minimizar o decaimento
#Filtros
#Espelhos dicróicos
#Microscopia de fluorescência
#Microscopia confocal
===Métodos de fluorescência em citogenética===
*Citogenética clássica vs citogenética convencional
#Hibridação in situ
#Sondas e DNA alvo
## Desnaturação
## Renaturação / hibridação
*Preparação da amostra
#Tipos de material biológico
#Fixação
#Pré-tratamento das lâminas
*Tipos de sonda
#Sequência repetitiva
#Single copy sequences
#Chromosome paiting
*Marcação das sondas
#Random primed labelling
#PCR
*Imunodectecção
#Marcação directa vs marcação indirecta
#Amplificação de sinal
#Método ABC
#Método Streptavidina-biotina
*Técnicas especiais de FISH
#SKY-FISH
# Zoo-FISH
# Fiber-FISH
# PRINS
# CGH
#PNA-FISH
# DNA microarrays / CGH microarrays
#Flow-cytometry FISH
===Diagnóstico citogenético===
====Citogenética médica clássica====
====Citogenética de interfase====
===Genética médica===
===Diagnóstico molecular hemáto-oncológico===
===Diagnóstico molecular de doenças infecciosas===
===Diagnóstico pré-natal===


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Conteúdos programático

Introdução ao diagnóstico molecular em medicina

  • Doenças monogénicas
  • Doenças poligénicas
  • Biologia forense
  1. CODIS
  2. STRs
  • Tipagem HLA
  1. Tipagem Celular por FACS
  2. Genotipagem por PCR
  3. Genotipagem por Microarrays
  • Farmacogenómica
  1. Citocromo P450
  • Susceptibilidade a doenças infecciosas
  1. Susceptibilidade genética: SCID
  2. Resistência genética: HIV
  • Doenças infecciosas
  1. Virologia
  2. Bacteriologia
  3. Resistência aos antibióticos
  • Epidemiologia molecular
  1. Filogenética
  2. Fingerprinting (genotipagem)

Bases Biológicas do Diagnóstico Molecular

  • Estrutura do DNA e RNA
  1. Organização do DNA
  2. RNAs codificantes e não codificantes
  3. RNA de interferência
  • Expressão genética e síntese proteica
  1. Transcrição
  2. Maquinaria de transcrição procariótica e eucariótica
  3. Edição do RNA
  4. Síntese proteica
  5. Modificações pós-translacionais

Ferramentas do Diagnóstico Molecular

  • Enzimas que modificam ácidos nucleicos
  • Sistemas e vectores de clonagem
  1. Plasmídeos
  2. Cosmídeos e fagmídos
  3. YACs, BACs
  4. Transformação, conjugação, transfeção e electroporação
  • Sistemas de selecção de recombinantes
  1. Antibióticos
  2. Sistemas auxotróficos
  3. Proteínas fluorescentes
  • Sistemas de produção de proteínas recombinantes
  • Bibliotecas genómicas (genotecas)
  • Hibridação de ácidos nucleicos
  1. Southern blotting
  2. Northern blotting

Métodos da baseados na Polimerase

  • Amplificações pela polimerase
  1. RFLP-PCR
  2. RAPD-PCR
  3. Multiplex PCR
  4. PCR Multiplex alelo específico
  5. PCR Longo
  6. PCR Competitivo
  7. PCR colony
  8. Touchdown (gradiente) e Hot Start
  9. PCR Degenerado
  10. PCR In situ
  11. PCR Inverso
  12. RACE
  13. Nested PCR
  14. RT-PCR / RT-PCR
  15. Methylation Spectific PCR (MS-PCR)
  • PCR em tempo real
  1. Conceitos
  2. Syber-green
  3. Sondas
  4. Curvas de calibração e quantificação

Métodos baseados na Ligase e MLPA

  • Aplicações pela ligase
  1. LCR
  2. MLPA
  • Métodos especiais
  1. DNA ramificado (bDNA)
  2. Ribotipagem

Fundamentos de fluorescência

  • Espectro electromagnético da luz visível
  1. Amplitude de onda
  2. Comprimento de onda
  3. Frequência
  • Fluoróforos
  1. Estado fundamental
  2. Estado excitado
  • Diagrama de Jablonski
  1. Lei de Kasha
  2. Lei de Planck
  3. Desvio de Stokes (Stokes shift)
  4. FRET - Förster resonance energy transfer
  5. Cromóforos e fluoróforos
  6. Quenching
  7. Detecção in vivo da interacção de proteínas
  8. Sondas moleculares
  • Microscopia
  1. Fluoróforos usados em microscopia
  2. Photobleaching (decaimento)
  3. Métodos para minimizar o decaimento
  4. Filtros
  5. Espelhos dicróicos
  6. Microscopia de fluorescência
  7. Microscopia confocal

Métodos de fluorescência em citogenética

  • Citogenética clássica vs citogenética convencional
  1. Hibridação in situ
  2. Sondas e DNA alvo
    1. Desnaturação
    2. Renaturação / hibridação
  • Preparação da amostra
  1. Tipos de material biológico
  2. Fixação
  3. Pré-tratamento das lâminas
  • Tipos de sonda
  1. Sequência repetitiva
  2. Single copy sequences
  3. Chromosome paiting
  • Marcação das sondas
  1. Random primed labelling
  2. PCR
  • Imunodectecção
  1. Marcação directa vs marcação indirecta
  2. Amplificação de sinal
  3. Método ABC
  4. Método Streptavidina-biotina
  • Técnicas especiais de FISH
  1. SKY-FISH
  2. Zoo-FISH
  3. Fiber-FISH
  4. PRINS
  5. CGH
  6. PNA-FISH
  7. DNA microarrays / CGH microarrays
  8. Flow-cytometry FISH

Diagnóstico citogenético

Citogenética médica clássica

Citogenética de interfase

Genética médica

Diagnóstico molecular hemáto-oncológico

Diagnóstico molecular de doenças infecciosas

Diagnóstico pré-natal

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