MOLDIAG:Syllabus: Difference between revisions
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==Conteúdos programático== | |||
===Introdução ao diagnóstico molecular em medicina=== | |||
*Doenças monogénicas | |||
*Doenças poligénicas | |||
*Biologia forense | |||
#CODIS | |||
#STRs | |||
* Tipagem HLA | |||
#Tipagem Celular por FACS | |||
#Genotipagem por PCR | |||
# Genotipagem por Microarrays | |||
*Farmacogenómica | |||
#Citocromo P450 | |||
*Susceptibilidade a doenças infecciosas | |||
#Susceptibilidade genética: SCID | |||
#Resistência genética: HIV | |||
*Doenças infecciosas | |||
#Virologia | |||
# Bacteriologia | |||
#Resistência aos antibióticos | |||
*Epidemiologia molecular | |||
# Filogenética | |||
# Fingerprinting (genotipagem) | |||
===Biossíntese e função de macromoléculas=== | |||
*Estrutura do DNA e RNA | |||
2.1.1. Organização do DNA | |||
2.1.2. RNAs codificantes e não codificantes | |||
2.1.3. RNA de interferência | |||
*Expressão genética e síntese proteica | |||
2.2.1. Transcrição | |||
2.2.2. Maquinaria de transcrição procariótica e eucariótica | |||
2.2.3. Edição do RNA | |||
2.2.4. Síntese proteica | |||
2.2.5. Modificações pós-translacionais | |||
===Engenharia Genética=== | |||
*Enzimas que modificam ácidos nucleicos | |||
*Sistemas e vectores de clonagem | |||
3.2.1. Plasmídeos | |||
3.2.2. Cosmídeos e fagmídos | |||
3.2.3. YACs, BACs | |||
3.2.3. Transformação, conjugação, transfeção e electroporação | |||
*Sistemas de selecção de recombinantes | |||
3.3.1. Antibióticos | |||
3.3.2. Sistemas auxotróficos | |||
3.3.3. Proteínas fluorescentes | |||
*Sistemas de produção de proteínas recombinantes | |||
*Bibliotecas genómicas (genotecas) | |||
*Hibridação de ácidos nucleicos | |||
3.6.1. Southern blotting | |||
3.6.2. Northern blotting | |||
===Amplificação de ácidos nucleicos - PCR=== | |||
*Amplificações pela polimerase | |||
4.1.1. PCR | |||
4.1.2. RFLP-PCR | |||
4.1.3. RAPD-PCR | |||
4.1.4. Multiplex PCR | |||
4.1.5. PCR Multiplex alelo específico | |||
4.1.6. PCR Longo | |||
4.1.7. PCR Competitivo | |||
4.1.8. PCR colony | |||
4.1.9. Touchdown (gradiente) e Hot Start | |||
4.1.10. PCR Degenerado | |||
4.1.11. PCR In situ | |||
4.1.12. PCR Inverso | |||
4.1.13. RACE | |||
4.1.14. Nested PCR | |||
4.1.15. RT-PCR / RT-PCR | |||
4.1.16. Methylation Spectific PCR (MS-PCR) | |||
*PCR em tempo real | |||
4.2.1. Conceitos | |||
4.2.2. Syber-green | |||
4.2.3. Sondas | |||
4.2.4. Curvas de calibração e quantificação | |||
*Aplicações pela ligase | |||
4.3.1. LCR | |||
4.3.2. MLPA | |||
*Métodos especiais | |||
4.4.1. DNA ramificado (bDNA) | |||
4.4.2. Ribotipagem | |||
===Métodos separativos: cromatografia e electroforese=== | |||
A.Análise de Proteínas | |||
*Electroforese | |||
5.1.1.1. Tipos de matrizes | |||
5.1.1.2. Electroforese nativa (PAGE) | |||
5.1.1.3. Electroforese desnaturante (SDS-PAGE) | |||
5.1.1.4. Focagem isoeléctrica (IEF) | |||
5.1.1.5. Géis 2D | |||
*Cromatografias | |||
5.1.2.1. De camada fina (TLC) | |||
5.1.2.2. Permuta iónica | |||
5.1.2.3. Afinidade / Imunoafinidade | |||
5.1.2.4. HPLC | |||
5.1.2.5. GC | |||
B.Ácidos nucleicos | |||
*Electroforese | |||
5.2.1.1. Agarose | |||
5.2.1.2. PFGE: Pulsed field gel electrophoresis | |||
5.2.1.3. Electroforese capilar (EC) | |||
5.2.2. HPLC desnaturante (DHPLC) | |||
5.2.2.1. EC vs DHPLC | |||
===Fundamentos de fluorescência=== | |||
*Espectro electromagnético da luz visível | |||
6.1.1. Amplitude de onda | |||
6.1.2. Comprimento de onda | |||
6.1.3. Frequência | |||
*Fluoróforos | |||
6.2.1. Estado fundamental | |||
6.2.2. Estado excitado | |||
*Diagrama de Jablonski | |||
6.4. Lei de Kasha | |||
6.5. Lei de Planck | |||
6.6. Desvio de Stokes (Stokes shift) | |||
6.7. FRET - Förster resonance energy transfer | |||
6.7.1. Cromóforos e fluoróforos | |||
6.7.2. Quenching | |||
6.7.3. Detecção in vivo da interacção de proteínas | |||
6.7.4. Sondas moleculares | |||
*Microscopia | |||
6.8.1. Fluoróforos usados em microscopia | |||
6.8.2. Photobleaching (decaimento) | |||
6.8.3. Métodos para minimizar o decaimento | |||
6.8.4. Filtros | |||
6.8.5. Espelhos dicróicos | |||
6.8.6. Microscopia de fluorescência | |||
6.8.7. Microscopia confocal | |||
===Métodos de fluorescência em citogenética=== | |||
*Citogenética clássica vs citogenética convencional | |||
7.1.1. Hibridação in situ | |||
7.1.2. Sondas e DNA alvo | |||
7.1.2.1. Desnaturação | |||
7.1.2.2. Renaturação / hibridação | |||
*Preparação da amostra | |||
7.2.1. Tipos de material biológico | |||
7.2.2. Fixação | |||
7.2.3. Pré-tratamento das lâminas | |||
*Tipos de sonda | |||
7.3.1. Sequência repetitiva | |||
7.3.2. Single copy sequences | |||
7.3.3. Chromosome paiting | |||
*Marcação das sondas | |||
7.4.1. Nick translation | |||
7.4.2. Random primed labelling | |||
7.4.3. PCR | |||
*Imunodectecção | |||
7.5.1. Marcação directa vs marcação indirecta | |||
7.5.2. Amplificação de sinal | |||
7.5.3. Método ABC | |||
7.5.4. Método Streptavidina-biotina | |||
*Técnicas especiais de FISH | |||
7.6.1. SKY-FISH | |||
7.6.2. Zoo-FISH | |||
7.6.3. Fiber-FISH | |||
7.6.4. PRINS | |||
7.6.5. CGH | |||
7.6.6. PNA-FISH | |||
7.6.7. DNA microarrays / CGH microarrays | |||
7.6.8. Flow-cytometry FISH | |||
===Métodos de fluorescência em citologia analítica=== | |||
*Imunoquímica | |||
8.1.1. ELISA | |||
8.1.2. Western-blotting | |||
*Citometria de flurorescência | |||
8.2.1. Tipos de citometros | |||
8.2.2. Dinâmica de fluídos | |||
8.2.3. Sondas fluorescentes | |||
8.2.4. Análise multiparamétrica | |||
8.2.5. Case studies | |||
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