MOLDIAG:Syllabus

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Conteúdos programático

Introdução ao diagnóstico molecular em medicina

  • Doenças monogénicas
  • Doenças poligénicas
  • Biologia forense
  1. CODIS
  2. STRs
  • Tipagem HLA
  1. Tipagem Celular por FACS
  2. Genotipagem por PCR
  3. Genotipagem por Microarrays
  • Farmacogenómica
  1. Citocromo P450
  • Susceptibilidade a doenças infecciosas
  1. Susceptibilidade genética: SCID
  2. Resistência genética: HIV
  • Doenças infecciosas
  1. Virologia
  2. Bacteriologia
  3. Resistência aos antibióticos
  • Epidemiologia molecular
  1. Filogenética
  2. Fingerprinting (genotipagem)

Bases Biológicas do Diagnóstico Molecular

  • Estrutura do DNA e RNA
  1. Organização do DNA
  2. RNAs codificantes e não codificantes
  3. RNA de interferência
  • Expressão genética e síntese proteica
  1. Transcrição
  2. Maquinaria de transcrição procariótica e eucariótica
  3. Edição do RNA
  4. Síntese proteica
  5. Modificações pós-translacionais

Ferramentas do Diagnóstico Molecular

  • Enzimas que modificam ácidos nucleicos
  • Sistemas e vectores de clonagem
  1. Plasmídeos
  2. Cosmídeos e fagmídos
  3. YACs, BACs
  4. Transformação, conjugação, transfeção e electroporação
  • Sistemas de selecção de recombinantes
  1. Antibióticos
  2. Sistemas auxotróficos
  3. Proteínas fluorescentes
  • Sistemas de produção de proteínas recombinantes
  • Bibliotecas genómicas (genotecas)
  • Hibridação de ácidos nucleicos
  1. Southern blotting
  2. Northern blotting

Amplificação de ácidos nucleicos - PCR

  • Amplificações pela polimerase
  1. RFLP-PCR
  2. RAPD-PCR
  3. Multiplex PCR
  4. PCR Multiplex alelo específico
  5. PCR Longo
  6. PCR Competitivo
  7. PCR colony
  8. Touchdown (gradiente) e Hot Start
  9. PCR Degenerado
  10. PCR In situ
  11. PCR Inverso
  12. RACE
  13. Nested PCR
  14. RT-PCR / RT-PCR
  15. Methylation Spectific PCR (MS-PCR)
  • PCR em tempo real
  1. Conceitos
  2. Syber-green
  3. Sondas
  4. Curvas de calibração e quantificação
  • Aplicações pela ligase
  1. LCR
  2. MLPA
  • Métodos especiais
  1. DNA ramificado (bDNA)
  2. Ribotipagem

Métodos separativos: cromatografia e electroforese

A.Análise de Proteínas

  • Electroforese
  1. Tipos de matrizes
  2. Electroforese nativa (PAGE)
  3. Electroforese desnaturante (SDS-PAGE)
  4. Focagem isoeléctrica (IEF)
  5. Géis 2D
  • Cromatografias
  1. De camada fina (TLC)
  2. Permuta iónica
  3. Afinidade / Imunoafinidade
  4. HPLC
  5. GC

B.Ácidos nucleicos

  • Electroforese
  1. Agarose
  2. PFGE: Pulsed field gel electrophoresis
  3. Electroforese capilar (EC)
  4. HPLC desnaturante (DHPLC)
  5. EC vs DHPLC

Fundamentos de fluorescência

  • Espectro electromagnético da luz visível
  1. Amplitude de onda
  2. Comprimento de onda
  3. Frequência
  • Fluoróforos
  1. Estado fundamental
  2. Estado excitado
  • Diagrama de Jablonski
  1. Lei de Kasha
  2. Lei de Planck
  3. Desvio de Stokes (Stokes shift)
  4. FRET - Förster resonance energy transfer
  5. Cromóforos e fluoróforos
  6. Quenching
  7. Detecção in vivo da interacção de proteínas
  8. Sondas moleculares
  • Microscopia
  1. Fluoróforos usados em microscopia
  2. Photobleaching (decaimento)
  3. Métodos para minimizar o decaimento
  4. Filtros
  5. Espelhos dicróicos
  6. Microscopia de fluorescência
  7. Microscopia confocal

Métodos de fluorescência em citogenética

  • Citogenética clássica vs citogenética convencional
  1. Hibridação in situ
  2. Sondas e DNA alvo
    1. Desnaturação
    2. Renaturação / hibridação
  • Preparação da amostra
  1. Tipos de material biológico
  2. Fixação
  3. Pré-tratamento das lâminas
  • Tipos de sonda
  1. Sequência repetitiva
  2. Single copy sequences
  3. Chromosome paiting
  • Marcação das sondas
  1. Random primed labelling
  2. PCR
  • Imunodectecção
  1. Marcação directa vs marcação indirecta
  2. Amplificação de sinal
  3. Método ABC
  4. Método Streptavidina-biotina
  • Técnicas especiais de FISH
  1. SKY-FISH
  2. Zoo-FISH
  3. Fiber-FISH
  4. PRINS
  5. CGH
  6. PNA-FISH
  7. DNA microarrays / CGH microarrays
  8. Flow-cytometry FISH

Métodos de fluorescência em citologia analítica

  • Imunoquímica
  1. ELISA
  2. Western-blotting
  • Citometria de fluxo
  1. Tipos de citometros
  2. Dinâmica de fluídos
  3. Sondas fluorescentes
  4. Análise multiparamétrica
  5. Case studies


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