User:Diogo Amaral/Notebook/Caderno BioMol/2010/04/20: Difference between revisions
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1º procederia à extração do DNA genómico dos elementos da família. | 1º procederia à extração do DNA genómico dos elementos da família. | ||
2º Usava primers standart para o gene da hemoglobina e fazia um PCR para amplificar a sequência | 2º Usava primers standart para o gene da hemoglobina (usava o nbci para achar a sequecia em 5' e 3') e fazia um PCR para amplificar a sequência | ||
3º Separava os fragmentos por electroforese e comparava os comprimentos com um padrão. | 3º Separava os fragmentos por electroforese e comparava os comprimentos com um padrão. | ||
4º Fazia uma sequenciação para identificar onde ocorreu a mutação | 4º Fazia uma sequenciação para identificar onde ocorreu a mutação | ||
* Proponha com detalhe adequado um procedimento experimental que permita o estudo da expressão do gene da beta-globina na família do nosso caso de estudo | |||
Era fazer um pcr ca polimerase reversa, os primers eram achados da mesma forma | |||
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Revision as of 11:27, 28 April 2010
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TP5
especifico de gene: É um primer com DNA complementar a uma sequencia específica de mRNA e deve ser usado quando queremos sequenciar o produto da transcrição de um gene conhecido, mas se houver uma mutação na zona do primer pode não ligar. oligo DT: É um primer de cDNA que se liga à cauda poly-A do mRNA (como a transcriptase reversa), na terminação 3' da seuquencia. A desvantagem é que se o gene for muito grande a enzima pode não conseguir chegar a extremidade 5' e consequentemente não sequenciar o local de intresse. A vantagem é que pode sequenciar mRNAs difrentes, já que a cauda de poly-A é comum. Primer Random: É um primer de DNA com 6 a 8 nucleótidos colocados aleatóriamente e como tal não corresponde a parte que queremos sequenciar, mas pode sequenciá-las, caso os primers anteriores tenham falhado. A desvantagem é que vai criar muitas sequênciaas desnecessárias pois liga-se a todos os tipos de mRNA.
1º procederia à extração do DNA genómico dos elementos da família. 2º Usava primers standart para o gene da hemoglobina (usava o nbci para achar a sequecia em 5' e 3') e fazia um PCR para amplificar a sequência 3º Separava os fragmentos por electroforese e comparava os comprimentos com um padrão. 4º Fazia uma sequenciação para identificar onde ocorreu a mutação
Era fazer um pcr ca polimerase reversa, os primers eram achados da mesma forma | |
