User:Gaston Paris/Notebook/Cloando FliM/2008/08/14

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Purificación por gel y ligación

  • Corrí un gel con las digestiones
  • Purifique por glass milk casero

Ligación

FliML Babo (L1) FliMS Babo (S1)
pET11Nde-Bam 1μL 1μL
Inserto 3μL 3μL
Buffer lig 10X 1μL 1μL
Ligasa Promega 1μL 1μL
H2O 4μL 4μL

ON en baño de agua a 16°C. Lo dejo en la mesada.


PCR FliML Bmel

PCR Bmel FliML
DNA Bmel 1/10 3μL
Brucella_FliM_ATG 10μM 5μL
Bmel_FliM_Stop_Bam 10μM 5μL
dNTPs 2mM 5μL
Buffer Pfu 10X 7,5μL
Pfu IIB 1μL
H2O 23μL

Los ciclos fueron

  • 94°C 5 min
  • 35 ciclos de
    • 94°C 30seg
    • 55°C 30seg
    • 68°C 2min
  • 68°C 10 min

Se bajo el ramping time a 1.5°C/seg


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