User:Uriel E Barboza Perez/Notebook/Cultivo de tejidos

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People who worked on this project:

• Brenda Briones
• Uriel E Barboza Perez
• Mariana Cazares
• Carolina Guizar

Objective

Practicas de Clase

[PROTOCOLO #1 PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PARA TÉCNICAS DE CTV]

OBJETIVO Preparar medio de cultivo MS que se empleará para desarrollar diferentes técnicas del CTV.

MATERIAL a) Preparación de soluciones stock

Materiales para la preparación del medio

• Pisetas

• Espátulas

• Recipientes para pesar los reactivos (charolas de pesado)

• Balanza analítica

• Parrilla de agitación magnética y calentamiento

• Barras magnéticas para agitación (moscas)

• Vasos de precipitados (5, 100, 250, 1000 y 2000 mL)

• Probetas para aforar (100 y 200 mL)

• Pipetas (1 y 5 mL)

• Potenciómetro

• Película plástica adherible tipo Ega-Pack • • Matraz aforado (50 mL)

• Frascos transparentes y frascos ámbar, con tapón esmerilado (50, 100 y 200 mL)

• Masking tape para etiquetar

• Marcador de tinta indeleble

• Autoclave

• Guantes de cocina para sujetar objetos calientes

• Cinta testigo

• Hojas de papel aluminio grueso de 10 x 10 cm y ligas

• Agitadores de vidrio

Reactivos para la preparación del medio: • Agua destilada

• Fitoreguladores (citocinina/auxina): Benciladenina (BA) / ácido naftalenacético (ANA)

• HCl 0.5 N para ajustar el pH y disolver citocinina

• Etanol absoluto para disolver auxina

• KOH 0.5 N

• Frascos gotero para soluciones de KOH y HCl 0.5 N

• Sacarosa (se puede sustituir por azúcar refinada)

• Agar bacteriológico (Bioxon®)

MÉTODOS

a) Preparación de soluciones stock

• Preparar por separado cada una de las soluciones stock. Para evitar la contaminación de los reactivos, pesarlos con espátulas diferentes, o bien limpiarlas después de cada uso.

• Pesar las cantidades (10x) que se indican en la Tabla 1 y disolver, en agitación constante, en una cantidad de agua destilada menor al volumen final de la solución. Para cada una de las soluciones, agregar los compuestos en el orden indicado y añadir el siguiente hasta que se disuelva completamente el anterior, de esta forma se evitara la precipitación de los compuestos.

• Aforar cada una de las soluciones al volumen señalado.

• Vaciar cada solución en un frasco con tapón esmerilado. La solución de Fe-EDTA se almacena en frasco ámbar (o se puede utilizar un frasco transparente envuelto en papel aluminio).