Etchevers:Notebook/Genomics of hNCC/2008/09/10

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Passages again

Passées:

hNCC céphaliques et hNCC troncales en conditions Panexin 5% (P) et milieu Riche (R). Une boite 35 mm en P et deux boites en R. 90% confluents ou plus par endroit.

Rincer PBS, 0.5 mL trypsine-EDTA 3 minutes 37ºC puis reprise dans 1 ml PBS sans Ca++/Mg++ et transfert au 7 ml de F12/ 15% sérum. Tourner 333g (1200 rpm) pour 5 minutes. Les cellules en P se collent encore beaucoup entre elles mais se détachent de la boite.

Comptages :

  • 5 champs de céphaliques (R) = 135 cellules, 2 mortes. Diamètre de cellules entre 3-4 par petits carrés. Si j’ai bien compris, ces 5 petits carrés font un grand de 1 mm, donc ils font 200 um et chaque diamètre de cellule, vaguement 50-60 um ? Semble gros.

Ajout: 5x trop gros. Voir ici. Heather 06:27, 15 September 2008 (EDT)

  • 5 champs de troncales (R) = 191 cellules, 4 mortes. Plus de variabilité dans le diamètre et aspect lisse des cellules.
  • 5 champs de céphaliques (P) = 42, beaucoup de doublets (en division ?) mais pas collées et pas de mortes
  • 5 champs de troncales (P) = 42, 1 morte. Plus régulièrement petites, 50 um.

Cela se traduit ainsi :

  • céphaliques (R) = 2.7 x 105 cellules sur les 10 cm ou ou 135 000 cellules par boîte 35 mm passée
  • troncales (R) = 3.82 x 105 cellules ou 191 000 cellules par boîte passée
  • céphaliques (P) et troncales (P) = 84 000 cellules par boîte passée

Ce n’est pas bien – elles ne prolifèrent pas, si on peut se fier aux comptages (absence de gros agglomérats) et pour le milieu+Panexin, ou les cellules céphaliques (R), elles périclitent carrément.

Pourtant, les céphaliques qui avaient une tête différente en milieux S ou 401 avant-hier ne sont pas très malheureuses aujourd’hui dans ces boîtes 10 cm. Les S sont un peu comme des chapeaux tricornes ou à 4 pointes, les 401 plus polyédrales. Mais bien disséminées et peu de mortes.

Les cellules qui flottaient dans la boite avec le milieu C6000 ont été reprises et centrifugées. J’ai resuspendu dans du bleu trypan et regardé : elles sont majoritairement vivantes (excluant le bleu) pourtant avec des blebs et vésicules, non lisses et rondes, et il y a aussi beaucoup de fantômes et de débris. A voir plus tard si tu n’essaies pas de les ressemer dans une boite 35mm avec un milieu qui favorise l’adhesion style 401, Stempan ou Panexin.

Pour l’instant il y a :

  • 2 vielles boîtes 10 cm du R1064 troncales dont le dernier change avant septembre était le 10 juillet ! Des photos de celles-ci sont sur l’autre ordinateur portable, à transférer. La semaine prochaine, trypsine puis remettre en boite 35 mm si jamais il en arrive. Ou puits plus petit mais il faut coater manuellement.
  • 1 boîte de 10 cm chacune pour R1066 céphaliques en :
  1. Stempan,
  2. Rich,
  3. 401 et
  4. Panexin 5%.
  • 1 boîte de 35 mm pour R1066 céphaliques en : C6000.
  • 1 boîte de 10 cm chacune pour R1066 troncales en :
  1. Rich et
  2. Panexin 5%.

Stéphane changera le milieu vendredi. Les Panexin 5% (P) ont 8 ml au lieu de 10 dans les autres boîtes 10 cm.

  • Heather 07:27, 10 September 2008 (EDT):
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