Alien Gene LongPCR
Amplification of AV212_A, AV_TEL_L_A, AV_240_B
'
|
[CONC]
|
1X
|
9
|
'
|
Water |
|
5.3 |
47.7 |
|
Takara LA Taq |
5U |
0.1 |
0.9 |
|
Takara LA Buffer |
10X |
1 |
9 |
|
dNTP |
2.5uM each |
1.6 |
14.4 |
|
*Template |
1ng |
1 |
9 |
|
Primer Mix |
5uM each |
1 |
|
|
|
|
10.0ul |
81 |
9.0ul/RXN
|
|
|
|
add 1.0 Primer Mix |
|
|
|
|
|
|
* AV or CCA3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
PCR Cycle |
|
|
|
|
94C |
1 min |
|
|
|
98C |
10 sec |
|
|
|
68C |
15 min |
|
|
|
|
30X |
|
|
|
|
Loaded 2.0ul of sample
AMP Lane
|
Template
|
Contents
|
'
|
Fosmid
|
MIX
|
1 |
CCA3 |
AV10011 FWD |
AV10016 RVS |
AV212_A |
2
|
2 |
AV |
AV10011 FWD |
AV10016 RVS |
AV212_A |
2
|
3 |
CCA3 |
AV10094 FWD |
AV10098 RVS |
AV_TEL_L_A |
16
|
4 |
AV |
AV10094 FWD |
AV10098 RVS |
AV_TEL_L_A |
16
|
5 |
CCA3 |
AV10041 FWD |
AV10042 RVS |
AV_240_B |
17
|
6 |
AV |
AV10041 FWD |
AV10042 RVS |
AV_240_B |
17
|
7 |
CCA3 |
AV10041 FWD |
AV10043 RVS |
AV_240_B |
18
|
8 |
AV |
AV10041 FWD |
AV10043 RVS |
AV_240_B |
18
|
9 |
CCA3 |
AV10041 FWD |
AV10044 RVS |
AV_240_B |
19
|
10 |
AV |
AV10041 FWD |
AV10044 RVS |
AV_240_B |
19
|
11 |
CCA3 |
AV10042 FWD |
AV10045 RVS |
AV_240_B |
20
|
12 |
AV |
AV10042 FWD |
AV10045 RVS |
AV_240_B |
20
|
13 |
CCA3 |
AV10043 FWD |
AV10045 RVS |
AV_240_B |
21
|
14 |
AV |
AV10043 FWD |
AV10045 RVS |
AV_240_B |
21
|
15 |
CCA3 |
AV10044 FWD |
AV10045 RVS |
AV_240_B |
22
|
16 |
AV |
AV10044 FWD |
AV10045 RVS |
AV_240_B |
22
|
|
Alien Genes New Primer Screen
Lane
|
Gene
|
Lane
|
Gene
|
1 |
AV10158 |
17 |
AV10084
|
2 |
AV10153 |
18 |
AV10082
|
3 |
AV10151 |
19 |
AV10075
|
4 |
AV10150 |
20 |
AV10071
|
5 |
AV10140 |
21 |
AV10045
|
6 |
AV10134 |
22 |
AV10043
|
7 |
AV10130 |
23 |
AV10042
|
8 |
AV10123 |
24 |
AV10041
|
9 |
AV10121 |
25 |
AV10034
|
10 |
AV10104 |
26 |
AV10028
|
11 |
AV10109 |
27 |
AV10027
|
12 |
AV10099 |
28 |
AV10025
|
13 |
AV10098 |
29 |
AV10016
|
14 |
AV10094 |
30 |
AV10011
|
15 |
AV10092 |
31 |
AV10007
|
16 |
AV10089 |
32 |
AV10002
|
|
Reaction mixture
|
conc.
|
1x
|
x33
|
Temp (Ithaca1 A2,A3,A5) |
?? |
2 |
66
|
TopTaq buffer |
10x |
1 |
33
|
dNTP mix |
10 mM each |
0.2 |
6.6
|
Primer mix |
5 uM each |
0.5 |
|
TopTaq (QIAGEN) |
5U/ul |
0.05 |
1.65
|
Milli Q |
|
6.25 |
206.25
|
|
|
10 ul |
|
PCR cycle |
|
|
|
94C |
3 min |
|
|
|
|
|
|
98C |
10 sec |
|
|
60C |
3 min |
|
|
x35 |
|
|
|
|
|
|
|
72C |
5 min |
|
|
|
Loaded 2.0ul of sample
Reaction mixture
|
conc.
|
1x
|
x33
|
Temp (Ithaca1 A6,B1,B3) |
?? |
2 |
66
|
TopTaq buffer |
10x |
1 |
33
|
dNTP mix |
10 mM each |
0.2 |
6.6
|
Primer mix |
5 uM each |
1 |
|
TopTaq (QIAGEN) |
5U/ul |
0.05 |
1.65
|
Milli Q |
|
5.75 |
189.75
|
|
|
10 ul |
|
PCR cycle |
|
|
|
94C |
3 min |
|
|
|
|
|
|
98C |
10 sec |
|
|
60C |
3 min |
|
|
x35 |
|
|
|
|
|
|
|
72C |
5 min |
|
|
|
Loaded 2.0ul of sample
|