User:Ana Claudia De O. Manata/Notebook/Aulas TP Bio Molecular/2010/05/04

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Vectores

Os vectores de DNA permitem a replicação, transporte e/ou expressão de segmentos de DNA de interesse para células alvo. Os vectores mais frequentemente utilizados são vectores plasmídicos, moléculas de DNA circulares derivadas de sequências de DNA bacteriano extra-cromossómico e modificadas para incluir elementos genéticos de interesse.

1. Quais as características básicas que um vector plasmídico deve ter?

- Origem de replicação; - Genes de resistência; - Local de policlonagem.

2. Os vectores podem ser representados pela sua sequência de DNA ou por mapas que incluem a indicação dos elementos mais relevantes presentes no vector. Pesquise no google imagens dos vectores pUC, pGEX, pcDNA, pEGFP e o sistema pTre/pTet-On. Que diferentes características apresentam estes vectores e para que servem?

- Origem de replicação, que confere capacidade de replicação independente dos cromossomas; - Gene(s) de resistência, que conferem à célula transformada fenótipos específicos, de modo a permitir a selecção das células transformadas/não transformadas; - Local de policlonagem, que possibilita a inserção de novos genes; - Vector procariótico, que é inserido numa célula procariótica: pUC, pGEX; - Vector eucariótico, que é inserido numa célula eucariótica para servir o seu propósito: pcDNA, pEGFP.

3. De que forma é que um vector plasmídico é mantido na célula alvo?

Devido a fenómenos de selecção natural e ao facto de expressar genes de resistências a antibióticos, o vector plasmídico é mantido funcional nas células alvo.

4. Para além de vectores de DNA simples como os plasmídeos, podem-se construir vectores mais complexos com base em vírus, facilitando a entrada das sequências desejadas nas células alvo. Entre estes, os vectores retrovirais são muito utilizados por permitirem a integração estável do DNA no genoma da célula alvo. Se tivesse que construir um destes vectores, como faria para garantir que não há perigo de infecção e doença?

Para evitar a infecção é necessária a produção de um vírus não reprodutível, mas completo como partícula, de modo a conseguir-se uma entrada eficaz e uma integração no genoma da célula alvo. É necessário também ter em atenção o local de integração do genoma viral para evitar que a integração tenha efeitos nefastos para a célula (por via de desregulação de genes, e.g. do ciclo celular).



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