User:Goncalo Correia/Notebook/BIOMOL/2010/05/04

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Vectores

Os vectores de DNA permitem a replicação, transporte e/ou expressão de segmentos de DNA de interesse para células alvo. Os vectores mais frequentemente utilizados são vectores plasmídicos, moléculas de DNA circulares derivadas de sequências de DNA bacteriano extra-cromossómico e modificadas para incluir elementos genéticos de interesse.

1. Quais as características básicas que um vector plasmídico deve ter?

Origin of Replication (ori), gene de resistência com promotor (ex: ampicillin resistance (amp), MCS (Multiple Cloning Site), com um promotor associado.

2. Os vectores podem ser representados pela sua sequência de DNA ou por mapas que incluem a indicação dos elementos mais relevantes presentes no vector.

Pesquise no google imagens dos vectores pUC, pGEX, pcDNA, pEGFP e o sistema pTre/pTet-On. Que diferentes características apresentam estes vectores e para que servem? pUC - Standard Vector. pGEX - Permite fazer proteínas de fusão, encaixa-se o gene de forma a produzir uma proteína contígua com a GST o que permite depois separar o produto desejado muito mais facilmente, através da trombina. pcDNA - Vector para usar em eucariotas além de procariotas, permite produzir mRNA em eucariotas, contém + resistência à Neomicin , promotores de vírus de eucariotas (CMV, SV40) e sinal de poliadenilação. pEGFP - Vector adequado a eucariotas e procariotas, com expressão de GFP. pTre/pTet-On - Possui um switch de expressão.

3. De que forma é que um vector plasmídico é mantido na célula alvo?


4. Para além de vectores de DNA simples como os plasmídeos, podem-se construir vectores mais complexos com base em vírus, facilitando a entrada das sequências desejadas nas células alvo. Entre estes, os vectores retrovirais são muito utilizados por permitirem a integração estável do DNA no genoma da célula alvo. Se tivesse que construir um destes vectores, como faria para garantir que não há perigo de infecção e doença?


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