User:Uriel E Barboza Perez/Notebook/Cultivo de tejidos
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People who worked on this project:
- Brenda Briones
- Uriel E Barboza Perez
- Mariana Cazares
- Carolina Guizar
Project Description/Abstract
Background
Objective
Practicas de Clase
[PROTOCOLO #1 PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO PARA TÉCNICAS DE CTV]
OBJETIVO Preparar medio de cultivo MS que se empleará para desarrollar diferentes técnicas del CTV.
MATERIAL a) Preparación de soluciones stock
Materiales para la preparación del medio
• Pisetas
• Espátulas
• Recipientes para pesar los reactivos (charolas de pesado)
• Balanza analítica
• Parrilla de agitación magnética y calentamiento
• Barras magnéticas para agitación (moscas)
• Vasos de precipitados (5, 100, 250, 1000 y 2000 mL)
• Probetas para aforar (100 y 200 mL)
• Pipetas (1 y 5 mL)
• Potenciómetro
• Película plástica adherible tipo Ega-Pack • • Matraz aforado (50 mL)
• Frascos transparentes y frascos ámbar, con tapón esmerilado (50, 100 y 200 mL)
• Masking tape para etiquetar
• Marcador de tinta indeleble
• Autoclave
• Guantes de cocina para sujetar objetos calientes
• Cinta testigo
• Hojas de papel aluminio grueso de 10 x 10 cm y ligas
• Agitadores de vidrio
Reactivos para la preparación del medio: • Agua destilada
• Fitoreguladores (citocinina/auxina): Benciladenina (BA) / ácido naftalenacético (ANA)
• HCl 0.5 N para ajustar el pH y disolver citocinina
• Etanol absoluto para disolver auxina
• KOH 0.5 N
• Frascos gotero para soluciones de KOH y HCl 0.5 N
• Sacarosa (se puede sustituir por azúcar refinada)
• Agar bacteriológico (Bioxon®)
MÉTODOS
a) Preparación de soluciones stock
• Preparar por separado cada una de las soluciones stock. Para evitar la contaminación de los reactivos, pesarlos con espátulas diferentes, o bien limpiarlas después de cada uso.
• Pesar las cantidades (10x) que se indican en la Tabla 1 y disolver, en agitación constante, en una cantidad de agua destilada menor al volumen final de la solución. Para cada una de las soluciones, agregar los compuestos en el orden indicado y añadir el siguiente hasta que se disuelva completamente el anterior, de esta forma se evitara la precipitación de los compuestos.
• Aforar cada una de las soluciones al volumen señalado.
• Vaciar cada solución en un frasco con tapón esmerilado. La solución de Fe-EDTA se almacena en frasco ámbar (o se puede utilizar un frasco transparente envuelto en papel aluminio).