User:Gaston Paris/Notebook/Cloando FliM/2008/07/29

Clonado LOV

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PCR para clonar FliM Calles 1, 2 y 3 Reactivos 1 2 3 DNA B. abortus 100ng/μL 1μL 1μL - DNA B. melitensis - - 3μL Brucella_FliM_ATG 10μM 5μL 5μL 5μL Babo_Stop_Bam 10μM 5μL 5μL - Bmel_Stop_Bam 10μM - - 5μL dNTPs 2mM 5μL 5μL 5μL Buffer pfu 10X 7,5μL 7,5μL 7,5μL pfu IIB 1μL 1μL 1μL H2O 25μL 25μL 23μL Los ciclos fueron 94°C 5 min 35 ciclos de 94°C 30seg 55°C 30seg 68°C 2min 68°C 10 min Repetición de PCR Reactivos S1 S1.2 S1.5 S2 L1 L1.2 L1.5 L2 DNA B. abortus 100ng/μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL Brucella_FliM_ATG 10μM 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL Babo_Stop_Bam 10μM 5μL 5μL 5μL 5μL - - - - Bmel_Stop_Bam 10μM - - - - 5μL 5μL 5μL 5μL dNTPs 2mM 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL 5μL Buffer pfu 10X 5μL 6μL 7,5μL 10μL 5μL 6μL 7,5μL 10μL pfu IIB 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL 1μL H2O 28μL 27μL 25.5μL 23μL 28μL 27μL 25.5μL 23μL MWM, PCR recombinates 1,2 y 3, S1, S1.2, S1.5, S2, L1, L1.2, L1.5 y L2 Los ciclos fueron 94°C 5 min 35 ciclos de 94°C 30seg 55°C 30seg 68°C 2min 68°C 10 min Se bajo el ramping time a 1.5°C/seg La PCR dió resultados positivos, en todas las concentraciones utilizadas