User:Qahunter

Materials   ‐ The first step in planning a PCR experiment is to record a list of your materials  1. Set up your Wiki web page report.  2. Enter the following as a formaed  bulleted list   in your report:   a. Lab coat and disposable gloves  b. PCR reacon mix, 8 tubes, 50 μL each: Mix contains Taq DNA polymerase, MgCl  2  , and dNTP’s  (hp://www.promega.com/resources/protocols/product‐informaon‐sheets/g/gotaq‐colorless ‐master‐mix‐m714‐protocol/)  c. DNA/ primer mix, 8 tubes, 50 μL each: Each mix contains a different template DNA. All tubes  have the same forward primer and reverse primer  d. A strip of empty PCR tubes  e. Disposable pipee ps: only use each only once.  Never reuse disposable pipee ps  . If you do,  the samples will become cross‐contaminated  f. Cup for discarded ps  g. Micropipeor  h. OpenPCR machine: shared by two groups      Table of samples and labels for your Wiki lab report:  Tube Label  PCR Reacon sample  Paent ID  G# P  Posive control  none  G# N  Negave control  none  G# 1‐1  Paent 1, replicate 1    G# 1‐2  Paent 1, replicate 2    G# 1‐3  Paent 1, replicate 3    G# 2‐1  Paent 2, replicate 1    G# 2‐2  Paent 2, replicate 2    G# 2‐3  Paent 2, replicate 3      The posive control is DNA from a person who tested posive for the disease SNP . The negave control is  DNA from a person who does not carry the  disease SNP . Paents 1 and 2 have never been tested before.  When you set up the PCR reacons (later on), you will run three trials, or   replicates  , for each paent.  HEATED LID: 100°C INITIAL STEP: 95°C for 2 minutes NUMBER OF CYCLES: 25 Denature at 95°C for 30 seconds, Anneal at 57°C for 30 seconds, and Extend at 72°C for 30 seconds FINAL STEP: 72°C for 2 minutes FINAL HOLD: 4°C