UA Biophysics:Protocols:Bacteria for Lipid Extraction ESP

Materiales para 4 g de célula

• Plato con SA401, máximo de un mes desde la recuperación
  
• Frasco de vidrio con 10 ml de LB
  
• 2 L de LB repartidos en Erlenmeyer de 500 ml, cada uno con 170 ml
  

Procedimiento

Dia 1 4:00 pm ON de SA401: una colonia en el frasco con 10 ml de LB.

Dia 2 8:30 am Dilución de las células: 10 ul del ON cada Erlenmeyer

Dia 3 8:30 am Concentrar la muestra

• Prepara la centrífuga a 4°C.
  
• Refrigerar los Erlenmeyer a 4°C mientras se centrífuga toda la muestra.
  
• Centrifugado 8500 rpm X 20 min a 4 grados en falcón con 40 ml de bacteria y descartar el sobrenadante
  

Nota: Se recomienda de cada Erlenmeyer se saca un plato de LB para verificar que las muestras no hayan sido contaminadas.

• Al terminar los falcón se congelan en nevera de –80°C (una noche) o en nitrógeno liquido (5 min).
  

Día 4 Liofilizar las células 24 horas para eliminar residuos de agua

Día 5 Al terminar la liofilización se unen todos los pellet en un solo falcon de 50 ml y se pesan.

Nota: Las células se almacenan a –80 grados.

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