UA Biophysics:Protocols:Elution Buffer ESP

Buffer Hepes: 400 mOsM, 2 L, pH 7.4

Materiales

• HEPES 9.532 g
• NaCl
• NaOH 1 M 30 ml
• HCl 1 M

Procedimiento

1. Colocar 1.8 litros de agua deionizada en la botella con un agitador.
2. Diluir el HEPES (concentracion final de 20 mM) y el NaCl (concnetracion final de 170 mM).
3. Ajustar pH a 7.4 usando NaOH y/o HCl (Generalmente se inicia con pH de 5.4)
4. Determinar la concentración de HCl y NaOH. Por ejemplo, si entre los dos se agregaron 16 ml a 1M, entonces para un buffer de 2 L la concentración es de 8 mM.
5. Calcular la osmolaridad y completar los 400 mOsm con NaCl.
6. Sacar el agitador y completar los dos litros con agua deionizada

Ejemplo

Material	MW (g/mol)	[] mM	mOsM	Cantidad
HEPES	238.30	20	20	9.532 g
NaCl	58.44	170	340	19.869 g
NaOH	--	8	8	16 ml
NaCl	58.44	16	32	1.870 g

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