UA Biophysics:Protocols:Lipid Extration ESP

Materials for 1 g of Cell

• Células SA401 pesadas y maceradas con mortero
• Cloroformo
• Metanol Opcional: Agregar 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol 0.1 % w/V (250 mg/250 ml) Para la extracción de carotenos, ya que los protegen de oxidación
• Perlas de vidrio
• Solución de NaCl 1.7 M (10% W/V)
• Opcional Na2SO4 anhidro (1 g/ 500 ml de solución)
• Fascos de vidrio de 50 ml

Nota: Preparar una mezcla de cloroformo:metanol (2:1) (20 ml de cloroformo/10 ml de metanol para un gramo de célula, mantener en hielo)

Procedimiento

1. Pesar células y macerarlas (1 g)
2. Colocarlas células en un frasco de vidrio con 10 perlas de vidrio grandes
3. Por cada 50 mg de células agregar 1 ml de cloroformo:metanol (2:1) (20 ml para 1 gramo de célula).
4. Vortex a cada frasco 5 min
5. Agregar 1/4 del volumen de la solución en solución salina (5 ml para 1 gramo de célula)
6. Continuar con un minuto de vortex cada 15 min durante 4 horas o hasta que la solución se vea homogénea
7. Dejar reposar en frio por 48 horas para separar las tres fases. Opcional: Puede centrifugar a 2000 rpm en frasco de vidrio por 15 min.
8. La fase de cloroformo se coloca en un recipiente limpio y presado previamente.
9. Se seca el cloroformo usando nitrógeno gaseoso y liofilización, luego se pesa el vial para determinar la masa de lípido recuperado.
10. El lipido se debe almacenar a -20°C.

Separación acetato de etilo/metanol/agua

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