UA Biophysics:Protocols:Nematode Growth Medium (NGM)
Materiales (para 200ml)
- 600 mg NaCl
- 3400 mg Agar (No low melting point!)
- 500 mg Peptone
- 200 ul 1M CaCl2
- 200 ul 5 mg/ml cholesterol in ethanol (Do not autoclave!)
- 5 ml 1 M KPO4 buffer pH 6.0
- 200 ul 1M MgSO4
- H2O (miliQ)
- Platos de petri
Preparación
1) Mezclar 600 mg NaCl, 3400 mg Agar, 500 mg Peptone en un Erlenmeyer de 500 ml. Agregar 195 ml H2O. Autoclavar por 50 mins.
2) Enfriar el Erlenmeyer en baño maría a 55°C por 15mins
3) Agregar 200 ul 1M CaCl2. Agitar.
4) Agregar 5 ml 1 M KPO4 buffer pH 6.0. Agitar.
5) Agregar 200 ul 1M MgSO4 Agitar.
6) Agregar 200 ul 5 mg/ml cholesterol in ethanol Agitar. En cámara de flujo laminar y bajo esterilidad
7) Verter el NGM en los platos de petri
8) Esperar a que el NGM solidifique y se enfríe
9) Cerrar y sellar los platos con parafilm por los bordes para que no se deshidraten
10) Dejarlos overnight.
11) Verificar que nada haya crecido en los platos (hongos o bacterias). Descartar los platos contaminados.
Almacenamiento
Los platos limpios y sellados pueden almacenarse por varias semanas. Verificar que no haya contaminantes y que el plato aún esté hidratado antes de usarlo.
