UA Biophysics:Protocols:Siembra de nemátodos
Día 1 1) Preparar medio para bacterias LB (250 ml) (https://openwetware.org/wiki/Gill:LB_broth)
2) Autoclavar LB
3) Autoclavar platos de petri (idealmente de los pequeños)
Día 2 (https://openwetware.org/wiki/Endy:Pouring_plates)
4) Derretir NGM en baño maría a 85°C
5) Verter el NGM en los platos
6) Esperar a que el NGM solidifique y se enfríe
7) Cerrar y sellar los platos con parafilm por los bordes para que no se deshidraten
8) Dejarlos overnight
9) Crecer E coli OP50 en 10ml de LB en el shaker a 37°C overnight.
Día 3
10) Verificar que nada haya crecido en los platos (hongos o bacterias). Descartar los platos contaminados.
11) Verificar que el LB con E coli OP50 se haya vuelto opaco. Esto garantiza que la bacteria ha crecido.
12) Poner 50ul de E coli OP50 en el centro de cada plato. Cerrar el plato y esparcir suavemente la gota de E coli inclinando el plato. Si se prefiere, se puede dejar la bacteria incubando por un par de horas a 37°C.
13) Hacer chunking de uno de los platos con C elegans a uno de los platos nuevos. Marcar los platos con las líneas que contienen. Garantizar la esteririldad al hacer el chunking. Las líneas no pueden cruzarse entre sí.
14) Cerrar los platos con parafilm para evitar que se deshidraten. Si el plato se ve deshidratado, puede aplicársele 50ul de buffer M9.
